冷凍電鏡應用場景:
晶體(ti) 結構解析。
絕對構型判定。
鹽與(yu) 共晶區分。
混合物組分結構測定。
同分異構確定。
冷凍電子顯微鏡技術簡稱冷凍電鏡:應用冷凍固定技術,低溫下使用投射電子顯微鏡觀察樣品的顯微技術,從(cong) 而得到生物大分子的結構。
電鏡觀察:樣品經過超低溫冷凍、斷裂、鍍膜製樣(噴金/噴碳)等處理後,通過冷凍傳(chuan) 輸係統放入電鏡內(nei) 的冷台即可進行觀察。其中,快速冷凍技術可使水在低溫狀態下呈玻璃態,減少冰晶的產(chan) 生,從(cong) 而不影響樣品本身結構,冷凍傳(chuan) 輸係統保證在低溫狀態下對樣品進行電鏡觀察。
1968年,AronKlug發現中心截麵定理,提出可以通過三維物體(ti) 不同角度的二維投影在計算機內(nei) 進行三維重構來解析獲得物體(ti) 的三維結構。根據這一原理,利用透射電鏡獲得生物樣品多個(ge) 角度的放大電子顯微圖像,即有可能在計算機裏重構出它的三維空間結構。在冷凍電子顯微學結構解析的具體(ti) 實踐中,依據不同生物樣品的性質及特點,可以采取不同的顯微鏡成像及三維重構方法。
目前主要使用的幾種冷凍電子顯微學結構解析方法包括:電子晶體(ti) 學、單顆粒重構技術、電子斷層掃描重構技術等,它們(men) 分別針對不同的生物大分子複合體(ti) 及亞(ya) 細胞結構進行解析。